waters液相色譜儀測定大豆胚軸中單糖鏈大豆皂甙的含量

　　一、waters液相色譜儀和試劑
檢測單元為Waters液相色譜儀是非常靈活的HPLC系統(tǒng)，包WatersTM 717 plus自動(dòng)進(jìn)樣器；Waters 600E控 制單元；WatersTM 805數(shù)據(jù) 處理機(jī)和 Waters 2410差示折光儀。液相色譜用試劑為色譜純。
二、色譜條件
色譜柱為 ODS-AM一303柱 （YMC，4．6 mm×250 mm，5肚m），柱溫 40℃，流動(dòng)相為含 0．1  三氟已酸的乙腈 一水 （40：60，v／v），流速1 mL rain～，高純氦氣脫氣 ，進(jìn)樣量 10 L，分析時(shí)間為 45 rain。
三、標(biāo)樣配制
大豆皂甙標(biāo)準(zhǔn)品，實(shí)驗(yàn)室自行制備，通過 IR、FAS-MS、 H—NMR和”C_NMR鑒定 ，液相色譜分析為單一峰。稱取Ba和Bb、Bd和Be、ag和Dg標(biāo)準(zhǔn)品 ，加甲醇溶解定容至 10 mL，分別配成濃度為0．561和 0．588、0．396和 0．503、0．344和 0．406 mg
mL叫的溶液，作為對照品溶液。分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品液10 L，供 HPLC分析。
四、試樣制備
大豆冷凍干燥后剝離胚軸 。將 3 kg大豆胚軸研磨粉碎 ，用15 L 50甲醇常溫提取 ，提取液經(jīng)噴霧干燥得粗粉 562 g。將粗粉用等體積正丁醇一水溶液萃取，取正丁醇層，經(jīng)減壓蒸餾、冷凍干燥，得總糖甙 223 g。
五、測定
稱取總糖甙 0．1 g，用甲醇定容至50 mL，以Milipore FH  0．5肚m過濾膜過濾后作為樣品供試液。分別吸取供試液 1O L，供 HPLC分析。
六、結(jié)論
建立了大豆胚軸中單糖鏈大豆皂甙的液相色譜測定方法。采用差示折光檢測法，結(jié)果峰面積值和進(jìn)樣量之間呈良好的線性關(guān)系 ，用于單糖鏈大豆皂甙的分析中優(yōu)于紫外檢測法。所建立的檢測方法靈敏度、重現(xiàn)性均能滿足一般分析要求 ，可用于大豆皂甙樣品中其它大豆皂甙的分析中。